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大鼠胰島素細(xì)胞傳代的方法
發(fā)布時(shí)間： 2021-12-09 點(diǎn)擊次數(shù)： 2478次大鼠胰島素細(xì)胞傳代方法：我們?cè)谑盏郊?xì)胞后，取出培養(yǎng)瓶在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況。
如果細(xì)胞已長滿，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：
1. 棄去培養(yǎng)液，用PBS（不含鈣，鎂離子）洗1-2次。
2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，倒轉(zhuǎn)放于37度培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱，然后又將培養(yǎng)瓶倒轉(zhuǎn)大約30秒后，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓分散，輕敲幾下培養(yǎng)培養(yǎng)瓶，細(xì)胞隨即脫落下來。
3. 加入6-8ml*培養(yǎng)基，吸出，分到新的培養(yǎng)瓶中。1:3~1:6傳代；2~3天1次。
如果細(xì)胞未長滿，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶，吸出培養(yǎng)液，僅留下10ml培養(yǎng)液在瓶?jī)?nèi)繼續(xù)培養(yǎng)。
細(xì)胞來源于美國ScienCell實(shí)驗(yàn)室、美國ATCC細(xì)胞庫，所有細(xì)胞均為原代細(xì)胞，非細(xì)胞系。細(xì)胞經(jīng)過嚴(yán)格的控制（從組織來源、實(shí)驗(yàn)室條件等方面），純度可達(dá)98％。不同的細(xì)胞傳代次數(shù)不一。多數(shù)細(xì)胞種類是從胚胎提取，于原代（或二代）凍存在液氮中。大鼠胰島素細(xì)胞采用干冰運(yùn)輸，客戶收到細(xì)胞后，從干冰中取出放入液氮中保存，待實(shí)驗(yàn)安排好后，解凍后即可以進(jìn)行復(fù)蘇培養(yǎng)。美國ATCC細(xì)胞庫、ScienCell實(shí)驗(yàn)室的細(xì)胞、培養(yǎng)基都是經(jīng)過嚴(yán)格檢驗(yàn)，分離、配制而成，產(chǎn)品質(zhì)量過硬。