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噬菌體效價測定法
發布時間： 2012-10-10 點擊次數： 2675次
雙層瓊脂培養法
1. 將之寄主細菌以液體培養法于適當溫度下培養,一般培養16~24小時.
2. 以1% peptone為稀釋液,將噬菌體原液做10倍序列稀釋,一般稀釋至107倍即可.
3. 取噬菌體稀釋液100 μl 與寄主菌液300 μl均勻混合,靜置15分鐘使其感染.
4. 將上述混合液加入5 ml 冷卻至45℃的0.7﹪瓊脂培養基中,均勻混合后立即平鋪于已凝固的1.8﹪瓊脂培養基上.
5. 將平板置于適合的溫度下,一般培養8~24小時,待溶菌斑產生后觀察并計算其數目.
6. 噬菌體效價（pfu/ml）＝溶菌斑數×稀釋倍數×取樣量折算數
例如:噬菌體原液稀釋倍數為107,取樣量測定量為0.1ml （則取樣量折算數為10）,三個平板的溶菌斑數目分別為275、252、263,則噬菌體原液的效價為:1/3（275+252+263）×107×10＝2.63×1010 （pfu/ml）
點滴法
1. 將之寄主細菌以液體培養法于適當溫度下培養,一般培養16~24小時.
2. 取300 μl寄主細菌懸浮液加入5 ml冷卻至45℃的0.7﹪瓊脂培養基中,均勻混合后立即平鋪于已凝固的1.8﹪瓊脂培養基上,并靜置30分鐘以上使其凝固.
3. 以1% peptone為稀釋液,將噬菌體原液做10倍序列稀釋,一般稀釋至107倍即可.
4. 將平板劃分為八個區域,以pipetman取不同稀釋倍數之噬菌體稀釋液各1 μl,分別接種于不同的區域上.
5. 將平板置于適合的溫度下,一般培養8~24小時,待溶菌斑產生后觀察并計算其數目.一般噬菌體濃度太高的區域會融合成一個大的溶菌斑,而濃度適中的區域會形成肉眼可觀察的溶菌斑.
6. 噬菌體效價 （pfu/ml）＝溶菌斑數×稀釋倍數×取樣量折算數
例如:噬菌體原液稀釋倍數為106,取樣測定量為0.001 ml （則取樣量折算數為1000）,三個滴定點的溶菌斑數目分別為15、18、16,則噬菌體原液的效價為:1/3（15+18+16）×106×1000＝1.63×1010 （pfu/ml）
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