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決定ELISA實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵-洗滌
發(fā)布時(shí)間： 2023-04-20 點(diǎn)擊次數(shù)： 1864次很多人做ELISA實(shí)驗(yàn)，覺得真簡(jiǎn)單，無非就是加樣，保溫，洗滌等操作步驟。可是實(shí)驗(yàn)結(jié)果經(jīng)常不盡人意。今天小編就給大家總結(jié)一下ELISA實(shí)驗(yàn)洗滌要點(diǎn)，掌握這些，實(shí)驗(yàn)So easy！
洗滌在 ELISA 過程中不是反應(yīng)聚，但卻是決定實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵。洗滌的目的是洗去反應(yīng)液中沒有與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。
聚苯乙烯待塑料對(duì)蛋白質(zhì)的吸附作用是普遍性的。因此在 ELISA 測(cè)定的反應(yīng)過程中應(yīng)盡量避免非特異性吸附，而在洗滌時(shí)又應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來。
在標(biāo)本和結(jié)合物的稀釋液和洗滌液中加入聚山梨酯（吐溫，Tween）一類物質(zhì)即右達(dá)到此目的。聚山梨酯是聚氧乙烯去水山梨醇脂肪酸酯，為非離子型的表面張力物質(zhì)，常作為助溶劑。
根據(jù)脂肪酸的種類而對(duì)聚山梨酯編號(hào)，結(jié)合月桂酸的為聚山梨酯 20，在 ELISA 中為常用。它的洗滌效果好，并具有減少非特異性吸附和增強(qiáng)抗原抗體結(jié)合的作用。
洗滌如過沒清洗干凈，特別在后一次，如有酶結(jié)合物的非特異性吸附，將使空白值升高。另外，在間接法中如血清標(biāo)本內(nèi)的非特異性 IgG 吸附在固相上而未被洗凈，也將與酶標(biāo)抗體作用而產(chǎn)生干擾。
ELISA 板的洗滌一般可采用以下方法：
①吸干孔內(nèi)反應(yīng)液；
②將洗滌液注滿板孔；
③放置 2 min，略作搖動(dòng)；
④吸干孔內(nèi)液，也可傾去液體后在吸水紙上拍干。洗滌的次數(shù)一般為 3～4 次，有時(shí)甚至需洗 5～6 次。