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蛋白質(zhì)與國產(chǎn)ELISA試劑盒相互作用的研究
發(fā)布時(shí)間： 2019-01-18 點(diǎn)擊次數(shù)： 2204次國產(chǎn)ELISA試劑盒與蛋白質(zhì)是生命活動(dòng)的執(zhí)行者，細(xì)胞內(nèi)的生理變化都是通過蛋白質(zhì)來實(shí)現(xiàn)的。但是生命活動(dòng)中各項(xiàng)功能和行為不是由單一的蛋白質(zhì)來完成的，需要蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)與核酸之間的相互作用來實(shí)現(xiàn)的。蛋白-蛋白互作網(wǎng)絡(luò)與轉(zhuǎn)錄調(diào)控網(wǎng)絡(luò)對調(diào)控細(xì)胞及其信號有重要意義。于是對于蛋白之間相互作用的研究也變的很重要，關(guān)于研究方法也是層出不窮。
在我們實(shí)驗(yàn)研究的過程中主要用到以下幾種技術(shù)：
1.酵母雙雜交（Y2H）
2.Pull-down技術(shù)
3.免疫共沉淀技術(shù)（Co-IP）
4.亞細(xì)胞共定位技術(shù)
5.噬菌體展示技術(shù)（PDT）
6.熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)（FRET）
7.雙分子熒光互補(bǔ)技術(shù)（BIFC）其中實(shí)驗(yàn)室比較常用的研究方法主要是前三種。這里對酵母雙雜交技術(shù)略作介紹和評述。
原理：
酵母雙雜交系統(tǒng)由Fields和Song等首先在研究真核基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控中建立的。酵母的半乳糖苷酶基因的轉(zhuǎn)錄激活因子GL4有兩個(gè)獨(dú)立的結(jié)構(gòu)域 ：N末端的DNA結(jié)合域（BD）和C末端的轉(zhuǎn)錄激活域（AD）。BD與DNA分子結(jié)合，AD激活下游基因的轉(zhuǎn)錄，國產(chǎn)ELISA試劑盒只有兩者在空間上充分接近才能激活下游基因的轉(zhuǎn)錄。于是將要研究的兩個(gè)蛋白分別與BD和AD融合，如果兩個(gè)蛋白有相互作用則AD和BD在空間上會(huì)接近進(jìn)而激活下游報(bào)告基因的轉(zhuǎn)錄。操作步驟：
（1）首先構(gòu)建已知蛋白的cDNA序列為誘餌，與DNA結(jié)合域融合（2）將待篩選的蛋白的cDNA序列與轉(zhuǎn)錄激活域融合，構(gòu)建成文庫質(zhì)粒（3）將這兩個(gè)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)化到酵母細(xì)胞中（4）通過檢測下游報(bào)告基因的表達(dá)篩選或確認(rèn)蛋白相互作用。優(yōu)缺點(diǎn)：
優(yōu)點(diǎn)：是可以在文庫中可以高通量篩選與目的蛋白相互作用的蛋白缺點(diǎn)：是假陽性多，還需要其他方法相互印證，國產(chǎn)ELISA試劑盒不適用于所有的蛋白